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pb2+对两种典型细菌的胁迫生理毒性研究

前言

随着工业化、城市化、农村集约化进程的加快,人为地排入大气、水体和土壤的重金属日益增多。在一定条件下,某些重金属(例如Pb2+)能在某些微生物的作用下转化为毒性更大的有机物质。另外,有毒重金属Pb2+可以长期停留与积累在环境中,通过食物链逐级富集,最终进入人体影响神经、造血、消化、泌尿、生殖和发育、心血管、内分泌、免疫、骨骼等各类器官,主要的靶器官是神经系统和造血系统。更为严重的是它可以通过遗传或母乳使婴幼儿的生长和智力发育,损伤认知功能、神经行为和学习记忆等脑功能受害, 严重者造成痴呆。因此,开展重金属Pb2+对典型细菌的胁迫生理毒性研究尤为重要。

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开展重金属Pb2+对典型细菌的胁迫生理毒性研究是从环境微生物学的角度,在实验室条件下,以革兰氏阴性大肠杆菌

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1 实验材料

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1.1实验供试菌种

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大肠杆菌

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1.2实验用品 http://www.paper51.com

1.2.1培养基 http://www.paper51.com

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1.2.2实验试剂

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溶液I-GET缓冲液、溶液II、溶液III-乙酸钾溶液、苯酚/氯仿/异戊醇溶液、TE缓冲液或双蒸水、5%~6%氨水、95%无水乙醇、70%乙醇、蒽酮、浓硫酸、葡萄糖标准液等。 paper51.com

1.2.3实验器材

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712可见分光光度计(上海菁华科技仪器有限公司制造)、Ar1140电子天平(上海梅特勒一托利多仪器有限公司)、YXQ-LS-50SII立式压力蒸汽灭菌器(上海博迅实业有限公司医疗设备厂)、ZHWY-11020恒温培养振荡器(上海仪器制造厂)、PH030A恒温培养箱(上海一恒科学仪器有限公司)、垂直流超净工作台(上海智诚分析仪器制造有限公司)、P270普通摇床、1cm光径石英比色杯、冷冻高速离心机等。 内容来自论文无忧网 www.paper51.com

2 实验方案设计与方法 http://www.paper51.com

两菌种经过24h、35℃条件下培养后用5ml无菌水洗脱斜面于液体培养基中,常温条件下摇瓶培养24h,按10%的接种量分别接种于添加了重金属Pb2+的完全培养基上,培养基中分别添加Pb Cl2,其质量浓度分别为0、10、20、30、40、60、80、100、160、200mg·L-1, 35℃条件下恒温摇瓶培养,在试验实施时根据不同微生物对重金属的敏感程度加以取舍,以不添加重金属离子的培养基作为对照(以CK表示),测定重金属Pb2+对不同微生物菌株的毒性影响,具体测定方法如下: 内容来自论文无忧网 www.paper51.com

2.1 Pb2+胁迫下微生物的生长曲线测定

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大肠杆菌、枯草芽孢杆菌预培养24 h,取20.0mL菌液接种于含不同质量浓度重金属的液体培养基中(加入不同质量浓度重金属铅的培养液200mL,121℃灭菌30 min),每个质量浓度梯度平行3次,恒温摇床培养,连续培养30 h,以光密度值(OD值)为纵坐标,培养时间t(h)为横坐标,绘制出不同微生物在重金属Pb2+胁迫时的生长曲线[5]。本实验采用比浊法测定,由于细菌悬液与浑浊度成正比,因此用紫外分光光度计吸收法测定细菌悬液在600nm处的光密度OD值,间隔2h/次,共测定记录15组数据。 http://www.paper51.com

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